产品货号：
YTB4511
中文名称：
RNase T1
英文名称：
Ribonuclease T1
产品规格：
100kU|500kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是通过大肠杆菌表达、纯化获得的高品质重组RNase T1，分子量为12.4kDa。
RNase T1来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)，是一种核糖核酸内切酶，特异性地在单链RNA的鸟嘌呤核糖核苷酸(G)后进行切割。在反应中，RNase T1切割鸟嘌呤核糖核苷酸3'-磷酸基团和相邻核糖核苷酸5'-羟基之间的磷酸二酯键，形成2’,3’环磷酸腺苷中间体，即使3’末端形成G-cP，随后水解为相应的3’末端带有GMP (G-P)的寡核苷酸[1]。RNase T1的活性不依赖于金属离子。
图1．百奥莱博的RNase T1对含单个G的单链RNA的酶切效果图。配制好反应体系后，37℃孵育15min进行反应。反应结束后，立即加入4μL 6X DNA Loading Buffer，100℃加热10min，取6μL进行尿素(7M)变性聚丙烯酰胺(15%)凝胶电泳。将1μL RNA Ladder(10～50nt，货号：YTB0206)与1μL 2X RNA Loading Buffer (货号：YTB0215)混合，100℃加热10min，取2μL分别与样品一起进行凝胶电泳。电泳结束后，将Redye (EB升级换代产品，10000X，货号：YTB0015)用双蒸水进行1:5000稀释，室温染色15min，并在紫外灯下观察实验结果。如图所示，40nt的底物RNA Oligos经RNase T1切割后，产生15nt和25nt的RNA Oligo产物。本产品与T公司的产品相比，对单链RNA具有基本一致的酶切效果。图中效果仅供参考，不同的实验条件下获得的实际检测效果可能会略有不同。
M：RNA Ladder(10～50nt)。
反应体系(20μL)：50mM Tris-HCl (pH7.5@25℃)，2mM EDTA，2mM DTT，2U/μL RNase Inhibitor(抑制RNase A等但不会抑制RNase T1)，2μM RNA Oligos。
去除DNA中的RNA；去除制备的重组蛋白中的RNA；RNA测序；与RNase A结合使用于核糖核酸酶保护分析(RNA protection assay)；测定不含G或低G含量DNA模板的转录水平。
由大肠杆菌表达，表达基因为米曲霉(Aspergillus oryzae)的rntA基因。
One unit of the enzyme causes an increase in absorbance of 1.0 at 260nm in 15min when yeast RNA is hydrolyzed at 37℃ and pH7.5。
保存：-20℃，有效期2年。
50mM Tris-HCl (pH7.4)，50% (v/v) glycerol。
10×Reaction Buffer：
500mM Tris-HCl (pH7.5),20mM EDTA。
纯度≥95%；
不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
金属离子Mg2+ (100mM MgCl2约抑制40%的活性)、Ca2+ (10mM CaCl2约抑制30%的活性)、Zn2+、Fe2+、Cu2+和单核苷酸(2'-GMP、3'-GMP等)均可抑制RNase T1的活性，Guanylyl 2'-5' guanosine是RNase T1的特异性抑制剂。RNase T1对热有较高的耐受性，在pH6.0的溶液中，可100℃加热耐受10min；但在pH>9.0的碱性溶液中不稳定。RNase T1的热失活是可逆的。将反应体系加热到100℃并不能终止反应。可通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除RNase T1。
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RNase T1来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)，是一种核糖核酸内切酶，特异性地在单链RNA的鸟嘌呤核糖核苷酸(G)后进行切割。在反应中，RNase T1切割鸟嘌呤核糖核苷酸3'-磷酸基团和相邻核糖核苷酸5'-羟基之间的磷酸二酯键，形成2’,3’环磷酸腺苷中间体，即使3’末端形成G-cP，随后水解为相应的3’末端带有GMP (G-P)的寡核苷酸[1]。RNase T1的活性不依赖于金属离子。
图1．百奥莱博的RNase T1对含单个G的单链RNA的酶切效果图。配制好反应体系后，37℃孵育15min进行反应。反应结束后，立即加入4μL 6X DNA Loading Buffer，100℃加热10min，取6μL进行尿素(7M)变性聚丙烯酰胺(15%)凝胶电泳。将1μL RNA Ladder(10～50nt，货号：YTB0206)与1μL 2X RNA Loading Buffer (货号：YTB0215)混合，100℃加热10min，取2μL分别与样品一起进行凝胶电泳。电泳结束后，将Redye (EB升级换代产品，10000X，货号：YTB0015)用双蒸水进行1:5000稀释，室温染色15min，并在紫外灯下观察实验结果。如图所示，40nt的底物RNA Oligos经RNase T1切割后，产生15nt和25nt的RNA Oligo产物。本产品与T公司的产品相比，对单链RNA具有基本一致的酶切效果。图中效果仅供参考，不同的实验条件下获得的实际检测效果可能会略有不同。
M：RNA Ladder(10～50nt)。
反应体系(20μL)：50mM Tris-HCl (pH7.5@25℃)，2mM EDTA，2mM DTT，2U/μL RNase Inhibitor(抑制RNase A等但不会抑制RNase T1)，2μM RNA Oligos。
去除DNA中的RNA；去除制备的重组蛋白中的RNA；RNA测序；与RNase A结合使用于核糖核酸酶保护分析(RNA protection assay)；测定不含G或低G含量DNA模板的转录水平。
由大肠杆菌表达，表达基因为米曲霉(Aspergillus oryzae)的rntA基因。
One unit of the enzyme causes an increase in absorbance of 1.0 at 260nm in 15min when yeast RNA is hydrolyzed at 37℃ and pH7.5。
| 组分 | 100kU | 500kU |
| RNase T1(1kU/μL) | 100μL | 500μL |
| 10×Reaction Buffer | 1mL | 5mL |
保存：-20℃，有效期2年。
50mM Tris-HCl (pH7.4)，50% (v/v) glycerol。
10×Reaction Buffer：
500mM Tris-HCl (pH7.5),20mM EDTA。
纯度≥95%；
不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
金属离子Mg2+ (100mM MgCl2约抑制40%的活性)、Ca2+ (10mM CaCl2约抑制30%的活性)、Zn2+、Fe2+、Cu2+和单核苷酸(2'-GMP、3'-GMP等)均可抑制RNase T1的活性，Guanylyl 2'-5' guanosine是RNase T1的特异性抑制剂。RNase T1对热有较高的耐受性，在pH6.0的溶液中，可100℃加热耐受10min；但在pH>9.0的碱性溶液中不稳定。RNase T1的热失活是可逆的。将反应体系加热到100℃并不能终止反应。可通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除RNase T1。
- 含G单链RNA的酶切：
- 对于含G单链RNA的酶切，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。
成分 用量 终浓度 DEPC Water (DNase,RNase free) (16.4-x)μl - 10×Reaction Buffer 2μL 1× RNase Inhibitor(40U/μL) 1μL 2U/μL DTT (100mM) 0.4μL 2mM Single-stranded RNA Containing G Nucleotide xμl RNA≤50ng/μl RNase T1(1kU/μL) 0.2μL 10U/μl Total volume 20μL -
注：为避免RNase A等环境中的RNase污染使底物RNA降解，建议在反应体系中加入RNase Inhibitor (为了维持RNase Inhibitor的活力，溶液中需要至少含有1mM DTT)。底物RNA应在RNase Inhibitor加入并混匀之后加入。 - 按上表配制好反应体系后，用移液器轻轻吹打混匀，随后离心沉降液体。如同时进行多个反应，可以把上表中除底物RNA之外的所有溶液和酶提前混合并分装，最后加入底物RNA。
- 反应条件：37℃孵育15分钟。根据实际情况，可适当延长孵育时间，使酶切反应更加充分。通常对于1μg RNA，如果是20μL反应体系，使用0.2μL RNase T1 (1kU/μL)进行酶切时，如果希望酶切比较充分，建议孵育30分钟。如果底物RNA的量比较少，可以适当缩短孵育时间。
- 对于含G单链RNA的酶切，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。
- 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。
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